BIS-TRIS-buffer CAS 6976-37-0

Det er en effektiv biologisk buffer med et effektivt pH-bufferområde på 5,8 -7,2 og en pKa-verdi på 6,5 (25 grader). I biokjemiske eksperimenter er mange biomolekyler som proteiner og nukleinsyrer svært følsomme for pH-verdier, og selv små endringer i pH kan påvirke deres struktur og funksjon. BIS-TRIS kan stabilisere pH-verdien til løsningen innenfor dette pH-området, og gir et stabilt miljø for biokjemiske reaksjoner. I prosessen med proteinseparasjon og rensing kan den naturlige konformasjonen til proteinet opprettholdes for å forhindre denaturering eller utfelling på grunn av pH-endringer.

For eksempel, i proteinrenseteknikker som ionebyttekromatografi og affinitetskromatografi, bruk avBIS-TRIS-bufferkan sikre at interaksjonen mellom proteiner og kromatografimedier skjer under stabile pH-forhold, og dermed forbedre renseeffektiviteten og renheten.

I enzymaktivitetsanalyser avhenger enzymaktivitet ofte av et spesifikt pH-miljø. pH-verdien til reaksjonssystemet kan kontrolleres nøyaktig for å gjøre det mulig for enzymet å utøve katalytisk aktivitet under optimale pH-forhold, og dermed nøyaktig måle enzymets aktivitet. Dette er av stor betydning for å studere egenskaper, virkningsmekanismer og utvikling av enzympreparater til enzymer.

BIS-TRIS har evnen til å koordinere med ulike metallioner og danne stabile komplekser, slik som Zn ² ⁺ - BIS-TRIS, Mn ² ⁺ - BIS-TRIS, etc. Disse metallionkompleksene spiller en viktig rolle i studiet av strukturen og analysen av metaller i biomolekyler. ioner fungerer ofte som kofaktorer for å delta i dannelsen av aktive sentre i proteiner. Ved å koordinere BIS-TRIS med metallioner kan strukturen til proteinmetallionkomplekser stabiliseres, noe som gjør det enklere å bruke teknikker som røntgenkrystallografi og kjernemagnetisk resonans (NMR) for strukturell analyse.

For eksempel krever de aktive sentrene til visse sinkholdige enzymer sinkioner for å opprettholde sin katalytiske aktivitet, og BIS-TRIS Zn ² ⁺-komplekser kan gi et stabilt strukturelt miljø for disse enzymene, noe som hjelper til med å nøyaktig analysere deres tre-dimensjonale strukturer.

I nukleinsyreforskning som DNA-sekvensering kan metallioner også være involvert i folding og funksjonell regulering av nukleinsyrer. Koordineringen mellom BIS-TRIS og metallioner kan regulere det lokale miljøet til nukleinsyrer, og påvirke interaksjonene mellom nukleinsyrer og proteiner, små molekyler, etc., og gir et kraftig verktøy for-dypende forskning på strukturen og funksjonen til nukleinsyrer.

BIS-TRIS har viktige anvendelser i proteinelektroforeseeksperimenter. SDS-PAGE (natriumdodecylsulfat polyakrylamidgelelektroforese) og Native PAGE (ikke-denaturerende polyakrylamidgelelektroforese) er vanlige proteinelektroforeseteknikker.BIS-TRIS-bufferbrukes ofte til å fremstille elektroforesebuffer for å opprettholde pH-stabiliteten til løsningen under elektroforese. I SDS-PAGE denatureres og lades proteiner negativt i en prøvebuffer som inneholder SDS og merkaptoetanol, og separeres deretter etter molekylstørrelse i polyakrylamidgel.

Den kan sikre stabiliteten til pH-verdien til elektroforesebufferen, slik at proteiner kan migrere på den forventede måten i et elektrisk felt, og dermed nøyaktig separere proteiner med forskjellig molekylvekt og detektere deres relative molekylvekter.

I Native PAGE opprettholder proteiner sin naturlige konformasjon for elektroforetisk separasjon. Bruk av det kan forhindre proteindenaturering på grunn av pH-endringer, bevare den naturlige aktiviteten og konformasjonsinformasjonen til proteiner, og bidra til å studere den naturlige tilstanden og interaksjonene til proteiner.

Western blotting er en viktig eksperimentell teknikk som brukes til å oppdage ekspresjonsnivået til målproteiner. Bis Tris propanbuffer brukes ofte som en proteintransportbuffer i immunoblotting-eksperimenter.

Under overføring av protein fra gel til membran kan Bis Tris propanbuffer opprettholde et stabilt pH-miljø, og sikre at proteinet overføres til membranen med korrekt konformasjon og ladetilstand. Dette er avgjørende for påfølgende antistoffbinding og signaldeteksjon.

Hvis proteiner gjennomgår denaturering eller konformasjonsendringer under overføringsprosessen, kan det føre til at antistoffer ikke kan gjenkjenne målproteinet nøyaktig, og dermed påvirke nøyaktigheten til eksperimentelle resultater. Derfor spiller Bis Tris propanbuffer en avgjørende rolle i immunblotting-eksperimenter, og bidrar til å forbedre følsomheten og påliteligheten til eksperimentene.

Cellekultur er en viktig teknologi innen biomedisinsk forskning, og cellekulturmediets pH-verdi har en betydelig innvirkning på cellevekst og metabolisme. BIS-TRIS propanbuffer kan brukes til fremstilling av cellekulturmedier for å opprettholde en stabil pH-verdi under cellekulturprosessen.

Ulike typer celler har varierende pH-krav, men krever generelt vekst i et miljø nær fysiologisk pH (ca. 7,2-7,4).

BIS-TRIS-propanbuffer kan buffere pH-endringene i kulturmediet under cellekultur, forhindre pH-svingninger forårsaket av metabolsk produktakkumulering, gassutveksling og andre faktorer, og gi et stabilt vekstmiljø for cellene. Dette er av stor betydning for normal vekst, spredning og funksjonell ekspresjon av celler, og bidrar til å forbedre suksessraten for cellekultur og påliteligheten til eksperimentelle resultater.

Nukleinsyreelektroforese er en ofte brukt metode for å påvise lengden og konsentrasjonen av målnukleinsyrer, inkludert DNA- og RNA-elektroforese. Egnet for nukleinsyreelektroforeseeksperimenter, det kan opprettholde pH-stabiliteten til elektroforesebufferen.

I nukleinsyreelektroforese migrerer nukleinsyremolekyler under påvirkning av et elektrisk felt basert på deres størrelse og ladningsegenskaper.

Det kan sikre stabiliteten til pH-verdien til løsningen under elektroforese, slik at nukleinsyremolekyler kan migrere på den forventede måten, og dermed nøyaktig separere nukleinsyrefragmenter av forskjellige lengder og detektere konsentrasjonene deres. Dette er av stor betydning for forskning som genkloning, genekspresjonsanalyse og nukleinsyresekvensering.

BIS-TRIS kan også brukes til å oppdage kreatinkinase. Kreatinkinase er et viktig enzym som spiller en avgjørende rolle i muskelenergimetabolismen. Bestemmelsen av aktiviteten er av stor betydning for diagnostisering av muskelsykdommer og evaluering av idrettsskader. I deteksjonsforsøket av kreatinkinase kan pH-stabiliteten til reaksjonssystemet opprettholdes for å sikre at enzymet viser katalytisk aktivitet under optimale pH-forhold. Ved nøyaktig å kontrollere pH-verdien, kan nøyaktigheten og påliteligheten av kreatinkinaseaktivitetsmåling forbedres, noe som gir sterk støtte for klinisk diagnose og forskning.

BIS-TRIS spiller også en viktig rolle i forskning og anvendelse av hemoglobin. Under separasjonsprosessen av hemoglobin kan dets stabilitet og aktivitet opprettholdes for å forhindre denaturering eller aggregering på grunn av pH-endringer. Dette er av stor betydning for rensing og strukturell forskning av hemoglobin.

BIS-TRIS kan effektivt beskytte hemoglobin under fryse-tørkeprosessen. Frysetørking er en vanlig metode for å konservere biologiske produkter, men proteiner kan bli skadet under fryse- og tørkeprosessen. Det kan gi et stabilt miljø for hemoglobin under fryse-tørkeprosessen, redusere proteindenaturering og inaktivering, og forbedre aktiviteten og stabiliteten til hemoglobin etter fryse-tørking.

IEF (isoelectric focusing electrophoresis) og 2-D gelelektroforese er vanlige teknikker innen proteomikkforskning, som brukes til å separere og analysere komplekse proteinblandinger. BIS-TRIS kan brukes som katodeelektrolytt for IEF/2-D gelelektroforese.

Under IEF-prosessen migrerer proteiner og fokuserer i en pH-gradient basert på deres isoelektriske punkt. BIS-TRIS-katolytten kan opprettholde pH-stabiliteten til elektroforesebufferen, og sikre at proteiner nøyaktig kan migrere til sitt isoelektriske punkt under den isoelektriske fokuseringsprosessen. I 2-D gelelektroforese, bruk avBIS-TRIS-bufferbidrar også til å forbedre separasjonseffekten og oppløsningen av proteiner, og gir høy-kvalitetsdata for proteomikkforskning.