Larazotide peptid

I fastfase peptidsyntese er det første trinnet å velge en passende harpiks som fastfasebærer. Vanlig brukte harpikser inkluderer Wang-harpiks, Rink Amide-harpiks, etc. De har forskjellige koblingsgrupper og kjemisk stabilitet, og kan velges i henhold til egenskapene til målpeptidet. Plasser harpiksen i en reaktor, tilsett en passende mengde diklormetan (DCM) eller N,N-dimetylformamid (DMF) for svelling, og bruk deretter reagenser som pyridin eller heksahydropyridin for å fjerne Fmoc- eller Boc-beskyttelsesgruppene på harpiksen, og eksponere de neste aminogruppene på harpiksen.

Løs opp aminosyrer med beskyttende grupper (som Fmoc Gly OH, Fmoc Val OH, etc.) i DMF, tilsett koblingsreagenser (som HBTU, HATU, DIC, etc.) og aktivatorer (som HOBt), bland grundig og tilsett til en reaktor som inneholder aktivert harpiks. Under passende temperatur (vanligvis romtemperatur) og omrøringsbetingelser gjennomgår aminosyrer kondensasjonsreaksjoner med aminogrupper på harpiksen, og danner peptidbindinger. Etter at koblingsreaksjonen er fullført, vask harpiksen med DMF for å fjerne ureagerte aminosyrer og reagenser.

Bruk pyridin eller heksahydropyridin for å fjerne Fmoc- eller Boc-beskyttelsesgruppen på den nylig koblede aminosyren, slik at den neste aminosyren kan kobles. Gjenta de ovennevnte koblings- og avbeskyttelsestrinnene, og koble sekvensielt aminosyrer som glycin, valin, leucin, valin, glutamin, prolin og glycin til harpiksen til syntesen av hele Larazotide peptidkjeden er fullført.

Etter at alle aminosyrer er koblet, fjern harpiksen fra reaktoren og rør reaksjonen ved romtemperatur med et skjærereagens (som en blandet løsning av trifluoreddiksyre, fenol, vann, triisopropylsilan, etc.) i flere timer for å kutte peptidkjeden fra harpiksen og fjerne beskyttelsesgruppen på aminosyresidekjeden. Etter at skjærereaksjonen er fullført, filtrer og fjern harpiksen og samle filtratet. Filtratet ble utfelt i iseter og sentrifugert for å oppnå det urene peptidet. Det urene peptidet ble renset ved høyytelses væskekromatografi (HPLC) for å fjerne urenheter og -biprodukter, noe som resulterte i høy-renhet Larazotide.

Velg en passende beskyttelsesstrategi og del Larazotidkjeden i flere kortere fragmenter, som syntetiseres separat i væskefasen. For eksempel kan små fragmenter som dipeptider og tripeptider syntetiseres først. Under synteseprosessen kobles aminosyrer med beskyttende grupper gradvis i passende løsningsmidler (som DMF, DCM, etc.) under påvirkning av koblingsreagenser og aktivatorer for å danne målfragmentet. Etter at hvert fragment er syntetisert, må det renses og karakteriseres for å sikre renheten og korrekt struktur.

Konjuger de syntetiserte fragmentene i flytende fase for å oppnå den komplette Larazotidkjeden. Fragmentkobling bruker vanligvis metoder som aktivert estermetode og blandet anhydridmetode. For eksempel å konvertere karboksylgruppen til ett fragment til en aktivert ester, og deretter reagere med aminogruppen til et annet fragment for å danne en peptidbinding. Etter at koblingsreaksjonen er fullført, må produktet renses og karakteriseres for å fjerne ureagerte fragmenter og-biprodukter.

Del et stort antall harpiksperler i flere like deler, og fest en annen aminosyre eller fragment til hver harpiksperle. Bland deretter disse harpiksperlene sammen og fortsett til neste koblingsreaksjon. Gjennom flere prosesser med segmentering, syntese og blanding, kan et stort antall Larazotide-analoger syntetiseres på kort tid.

Etter syntese, screen peptidbiblioteket for Larazotide-analoger med spesifikke biologiske aktiviteter. Screeningsmetodene kan bruke teknikker som biologisk aktivitetsanalyse og høy-gjennomstrømningsscreening. Strukturell identifikasjon og videre forskning av de screenede aktive forbindelsene gir grunnlag for strukturell optimalisering og medikamentutvikling av Larazotide.